上期咱们聊到纳米抗体的发现史和应用优势，可能很多小伙伴还是没有具体概念，不知道这门新技术到底是不是像小 P 吹嘘的那么好，会不会只是我单方面的王婆卖瓜？小 P 这里不做过多的辩解，毕竟都是科研人，咱们向来以数据服人！本次实验以 ChromoTek 的 GFP-Trap 作为主角，实例展示一下纳米抗体的优越性。GFP-Trap 是 ChromoTek 旗下 Nano-Traps 系列代表产品之一。Trap 是陷阱、捕获器的意思，顾名思义 GFP-Trap 就是捕获 GFP（GFP 或携带 GFP 标签的融合蛋白）的一种技术。其基本原理是通过将靶向 GFP 的羊驼纳米抗体，与固相载体（琼脂糖珠、实心磁珠、多孔板等）直接共价偶联，形成一个高效捕获 GFP 融合蛋白的工具。 通过这个 GFP-Trap 工具，我们可以高效快速沉淀高纯度的 GFP 融合蛋白。具体有多快速高效呢？没有对比就没有暴击伤害，上图！上图左边是通过 GFP-Trap 进行 IP 实验，右边是通过传统 GFP 抗体进行 IP 实验（注：I 代表 Input，FT 代表 flow through，B 代表 bound，hc 代表 heavy chain，lc 代表 light chain）。 通过以上实验结果我们不难判断出：（1）GFP-Trap 不仅亲和力高，并且与基质结合紧密，抓取蛋白完全（FT 中几乎没有 GFP 融合蛋白的漏网之鱼）；而传统抗体需要借助 ProteinA/G 才能与基质相连，结合能力较弱，部分抗体与蛋白会脱落，抓取蛋白不完全（FT 中有明显的 GFP 融合蛋白条带）。（2）GFP-Trap 采用的是羊驼单域抗体，只有一个 VHH 结构域，完全不存在重链（hc）和轻链(lc)干扰；而传统抗体存在重链和轻链解体的情况；在结果中会出现重链和轻链两条非特异性条带。当然啦，上图的结果还是不能展示整个IP过程的迅速，为此我们还展开了以下实验：上图左边是通过 GFP-Trap 针对 EGFP 蛋白进行 IP 实验，以抗体与蛋白孵育时间长短进行梯度实验。（注：I 代表 Input，FT 代表 flow through，B 代表 bound）。根据以上实验结果我们不难发现：（3）GFP-Trap 对 EGFP 蛋白具有高效的捕获能力，30min 基本可以捕获所有靶标蛋白（FT 中基本无残留的 EGFP 条带）。做过 IP 实验的朋友，想想整个 IP 过程中什么最费时？不就是抗体孵育吗？少则 3-4h，多则 4℃ 过夜！如果采用 GFP-Trap，咱们甚至可以在 60min 内，完成一个 IP 实验！（时间是最宝贵的资源。）除了以上三个优点之外，GFP-Trap 还有另外的隐藏天赋。（4）GFP-Trap 在各种缓冲液中表现出超常的稳定性，即便在高盐（2M NaCl）、表面活性剂（2% NP-40 、1% SDS、1% Triton X-100、3% Deoxycholate）、还原剂（1mM DTT 或 0.2mM TCEP）、离液剂（3M Guanidinium•HCl、8M Urea）、高温（68℃）的环境中，咱们的 GFP-Trap 依旧能将 GFP 融合蛋白稳稳地抓住！ 俗话说的好，酒香不怕巷子深。GFP-Trap 这么优秀，自然会被科学家们慧眼识珠啦。（5）截止北京时间 2020 年 12 月，GFP-Trap 已经累计被 SCI 文章引用 2334 次！说一句免疫沉淀实验的金标准不算太过分吧。捕获 GFP 蛋白，就选 GFP-Trap ！当然啦，除了 GFP-Trap 这个神器之外，ChromoTek 还拥有多系列优越的产品和技术：关于这些技术详情，篇幅有限咱们这里就不赘述了，感兴趣的小伙伴，直接点击即可直接下载 ChromoTek 产品手册，了解新技术详情。
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